¿POR QUÉ LA FILTRACIÓN ES TAN IMPORTANTE PARA EL DESARROLLO DE MÉTODOS Y LA PREPARACIÓN DE MUESTRAS?

¿POR QUÉ LA FILTRACIÓN ES TAN IMPORTANTE PARA EL DESARROLLO DE MÉTODOS Y LA PREPARACIÓN DE MUESTRAS?

OMEGA PERU BLOG

22 de Agosto del 2019

¿POR QUÉ LA FILTRACIÓN ES TAN IMPORTANTE PARA EL DESARROLLO DE MÉTODOS Y LA PREPARACIÓN DE MUESTRAS?

Pall tiene una opción de filtro para satisfacer todas las necesidades analíticas

Ya sea que esté realizando un trabajo de I + D o monitoreando la fabricación y el control de calidad, proteger la integridad y la validez de los resultados es esencial. Sin embargo, es difícil obtener datos precisos y reproducibles cuando la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y las columnas de cromatografía líquida de ultra alta presión (UHPLC) funcionan de manera subóptima. Una forma de mejorar ese rendimiento es filtrar tanto la muestra como las fases móviles antes del análisis. En esta publicación, Thomas Valorose, gerente de producto global, Analítico en Pall Laboratory, explica qué hace que la filtración sea tan importante durante la preparación de la muestra.

¿ Por qué es Importante la filtración de muestras?

Valorose nos explica que la respuesta número uno es que se extiende la vida útil de una columna de HPLC al evitar que las partículas la bloqueen. También permite disminuir el mantenimiento del sistema al reducir el desgaste excesivo de componentes como válvulas de retención, bombas de pistón y sellos de la bomba. Desde una perspectiva de datos, se  reducen los picos fantasmas, las desviaciones de la línea de base y las interferencias.

Cuando pensamos en lo que les sucede a las partículas en una columna, las partículas sin filtrar viajan a través de la columna y quedan atrapadas en los espacios intersticiales entre las diferentes partes de la fase estacionaria. La zona de los extremos de las columnas tienen tamaños de poro aún más pequeños para atrapar esas partículas, entonces, las partículas que no filtramos también se obstruyen allí.

La parte frontal de la columna se obstruye más rápido que el resto de la columna, lo que afecta la data y el sistema de presión; básicamente, detiene el análisis. Los laboratorios terminan repitiendo el trabajo e incrementando la frecuencia del  mantenimiento preventivo que de otro modo no harían.

Selección del mejor filtro para el análisis

Valorose nos menciona que hay varios tipos de filtros y materiales disponibles. Algunos se especifican en los métodos reglamentarios, por lo que los laboratorios que siguen estos métodos son renuentes a  desviarse de ellos.

Pero cuando pensamos en análisis que no están especificados para un determinado tipo de material, los laboratorios deben considerar la solución de la muestra y si el filtro es compatible con lo que están tratando de procesar y analizar. La polaridad del solvente ayudará a determinar si se necesita un filtro hidrofílico (p. Ej., PTFE) para elementos como solventes orgánicos o un filtro hidrofílico (p. Ej., Nylon, PVDF o PES) para soluciones acuosas. También se debe de considerar el rango de pH y cuáles membranas son compatibles con qué pH.

Los laboratorios también deben considerar los analitos que intentan detectar. El nylon se usa típicamente con moléculas pequeñas, pero con menos frecuencia con proteínas y péptidos. El PVDF, por el contrario, se usa con proteínas y péptidos debido a su naturaleza de bajo enlace.

Además, ni la membrana ni la carcasa deben agregar contaminantes químicos a los cromatogramas o la data.

Pall ofrece el filtro de jeringa Acrodisc OneTM, que es adecuado para todas estas aplicaciones. Puede filtrar soluciones orgánicas, acuosas, ácidos y bases. Tiene una membrana hidrófila, Membrana de PTFE (wwPTFE) humedecida en agua que permite a los laboratorios usar un tipo de filtro para todos los análisis y los analitos de la muestra. Para el analista, se reduce el tiempo de validación del método y se simplifica el proceso de desarrollo del mismo. También elimina la necesidad de tener múltiples filtros a la mano.

El filtro de jeringa Acrodisc One tiene una alta retención de partículas, lo que protege la columna y extiende su vida útil hasta 52 veces más que si se usara con muestras sin filtrar. Eso puede traducirse en $ 26,000– $ 30,000 en ahorros en costos solamente en material.

El filtro es de bajo enlace a fármacos y proteínas. No sesgará los datos eliminando nada de la muestra, y contribuye con extraíbles mínimos. Este producto ultralimpio es adecuado para numerosas aplicaciones en diversos entornos de laboratorio.

La membrana wwPTFE como apoyo para elegir la mejor membrana según su aplicación

El analista nos explica que se trata de desarrollar métodos, simplificar el proceso y la validación de métodos.

Al desarrollar y validar métodos, los analistas deben tener en cuenta las interacciones químicas entre sus muestras y el filtro, y cómo estas afectan los resultados. Sus muestras pueden estar en un rango de condiciones diferentes, junto con diferentes concentraciones de analito. A partir de ahí, los analistas filtran las muestras a través de las diferentes membranas químicas que podrían utilizar y ver cómo afectan los resultados.

El nuevo filtro de jeringa Acrodisc One de Pall Laboratory simplifica y valida el proceso con solo un producto. Independientemente de la polaridad de la muestra, el pH o el analito objetivo, solo una membrana química requiere una validación cuando se utiliza Acrodisc One con membrana wwPTFE. Los analistas no tienen que preocuparse por mezclar y hacer coincidir las condiciones de la muestra con las membranas y validar cada resultado. Pueden tomar cualquier condición de muestra que encuentren en su laboratorio, filtrarla a través del filtro de jeringa Acrodisc One, teniendo en cuenta que es una química inerte que no afectará la muestra y posteriormente validarla a través de ese proceso.

Importancia de la filtración de la fase móvil para la Operación de HPLC o UHPLC

La mayoría de las personas compran reactivos de grado HPLC y asumen que se pueden usar al instante. Sin embargo, filtrar la fase móvil es tan importante como filtrar la muestra. Nunca es seguro asumir que una fase móvil está libre de residuos de partículas, incluso si no se pueden ver a simple vista. Por lo tanto, siempre es una buena idea filtrar a través de un filtro de 0,45 μm o de 0,2 μm, dependiendo de las necesidades del sistema.

Similar al filtrado de muestras, este proceso reduce el desgaste general del sistema y prolonga la vida útil de la columna. También desgasifica las muestras, lo cual es una parte clave para mantener un sistema HPLC o UHPLC funcionando de manera óptima. Eliminar los gases disueltos previene la formación de burbujas que podrían cambiar líneas de base, crear cambios en tiempos de retención y proporcionar datos cuestionables.

Para filtrar fases móviles, Pall recomienda el portafiltros SolVac® junto con los filtros de disco de membrana de 47 mm. Esto reemplaza a los embudos de vidrio tradicionales, lo cual es una mejora significativa en la seguridad y la facilidad de uso para los analistas. Con los embudos de vidrio tradicionales, el analista debe sostener una botella de litro llena de solvente sobre el banco de laboratorio, verter y esperar a que se filtre antes de transferir el solvente al depósito de la fase móvil de HPLC.

El SolVac se encuentra justo encima del depósito de la fase móvil y se filtra directamente de la botella de disolvente. Luego, el depósito se puede colocar directamente en el sistema HPLC, lo que reduce la contaminación cruzada y mejora la seguridad del analista. Debido a que el portafiltro está hecho de polipropileno duro, los analistas no tienen que preocuparse de que se rompa.

Una cosa más que es importante recordar es que debido a que pasamos por el desarrollo del método y la validación de la muestra con la membrana wwPTFE y el filtro de jeringa Acrodisc One, también queremos usar el mismo tipo de material de membrana para filtrar la fase móvil. Reduce el tiempo que lleva racionalizar el proceso y realizar el desarrollo de métodos y la preparación de muestras.

Filtro de jeringa: dispositivo adecuado para cualquier muestra en el laboratorio

Pall recomienda filtros de jeringa para volúmenes de aproximadamente 2–125 ml. Para volúmenes más bajos, recomendamos nuestro Nanosep MF con la membrana wwPTFE. Tiene la misma química de membranas, y hacer que esté disponible en todos los formatos de productos facilita el ajuste de volúmenes sin tener que revalidar contra diferentes tipos de materiales.

Este producto está disponible en tamaños de poro de 0.2 μm y 0.45 μm, y es un pequeño dispositivo centrífugo. Es apropiado para volúmenes de hasta 500 µL y tiene un volumen de retención de aproximadamente 2 µl. Cuando los laboratorios trabajan con volúmenes ultrapequeños, pueden centrifugar y recuperar todas las muestras antes de que lleguen al instrumento.

Si los laboratorios trabajan con más de una muestra o intentan diseñar un experimento o establecer un estudio de detección, Pall ofrece las placas de filtro AcroPrep Advance de 96 pocillos. Con 96 pocillos, son apropiados para el manejo automatizado de líquidos y el análisis de alto rendimiento. Los clientes también pueden configurar evaluaciones en cada uno de los pozos para determinar la mejor manera de avanzar en la investigación.

En resumen: Para volúmenes pequeños, usamos el Nanosep MF. Para volúmenes medios, usamos un filtro de jeringa Acrodisc de 13 mm o Acrodisc One. Y para muestras múltiples, filtramos a través de la placa de filtro AcroPrep Advance de 96 pocillos. Pall tiene una opción de filtro para satisfacer todas las necesidades analíticas.

Productos

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