La importancia de la filtración en los flujos de trabajo de cromatografía líquida y espectrometría de masas (LC-MS)

Se ha demostrado que la filtración de muestras es una herramienta importante para mejorar los resultados de LC-MS. Existen resultados de estudios recientes que analizaron las mejoras posibles gracias a la filtración de muestras con filtros de jeringa antes de la HPLC, y cómo obtener estas mejoras sin introducir otros errores y efectos no deseados.

LC-MS es una poderosa técnica analítica que se utiliza para diversas aplicaciones cualitativas y cuantitativas. La detección se logra en la espectrometría de masas (MS) mediante la ionización de los analitos en el efluente cromatográfico. Aproximadamente el 75% de los usuarios de LC-MS utilizan ionización por electropulverización (ESI) como interfaz entre la cromatografía líquida y la MS. Sin embargo, a pesar de la versatilidad de ESI, esta técnica de ionización adolece de un fenómeno conocido como efecto matriz.

El efecto de la matriz se atribuye típicamente a los componentes presentes en la matriz de la muestra que coeluyen con los compuestos de interés. Esta competencia puede suprimir (supresión de iones) o mejorar (mejora de iones) la eficacia de detección de los analitos objetivo, lo que a menudo conduce a una precisión y una precisión deficientes de los resultados cuantitativos. Una forma de minimizar el efecto de la matriz es mejorando el método de preparación de muestras analíticas, que normalmente incluye la filtración de muestras antes del análisis. Si se requiere la filtración de la muestra, es fundamental que los filtros no aporten ningún material extraíble / lixiviable que pueda influir en la eficiencia de ionización de los analitos objetivo.

Filtros de jeringa de alto rendimiento y baja lixiviación

En el primer estudio, se compararon los filtros de jeringa de tres proveedores para evaluar la contribución de compuestos lixiviables indeseables que los filtros contribuían al efluente filtrado antes de cargarlo en la columna de HPLC. El primer estudio comparó la limpieza de los efluentes de los tres siguientes filtros:

• Filtro MS Jeringa Acrodisc de Pall ®,

• Competidor A (filtro PVDF)

• Competidor B (filtro de PTFE hidrófilo)

Figura 1: Cromatogramas TIC superpuestos que muestran el control (fluido de prueba sin filtrar) y los efluentes de los filtros de jeringa Pall Acrodisc MS, los filtros de la competencia A y los filtros de la competencia B. Se analizaron 10 muestras de cada uno. Los resultados pueden variar.

Como se puede ver en la figura 1, el filtro de jeringa Acrodisc MS muestra un nivel significativamente más bajo de compuestos lixiviables en el efluente después del paso de filtración de la muestra. En los tres gráficos, el filtro de jeringa Acrodisc no muestra casi ninguna diferencia perceptible con el medio de control sin filtrar. Por el contrario, las trazas de los otros dos tipos de filtros muestran que ambos han contribuido con compuestos lixiviados a la matriz, con efectos colaterales en los resultados de la especificación de masas.

En un segundo estudio, se compararon los mismos tres filtros por su nivel de efecto de matriz, utilizando muestras de tres sustancias farmacéuticas diferentes añadidas en metanol de grado HPLC. A continuación, las muestras se analizaron usando cromatografía líquida de ultra alta resolución acoplada a cromatografía de masas por electropulverización.

Figura 2: Comparación del% de efecto de matriz (ME) observado a diferentes concentraciones en los efluentes de 3 filtros diferentes. Las líneas discontinuas en cada gráfico indican que no hay efecto de matriz (es decir,% ME = 100%). Se analizaron 25 muestras de cada uno. Los resultados pueden variar.

Como se puede ver en la figura 2, los filtros de jeringa Acrodisc MS superan consistentemente a los otros dos filtros, con niveles más bajos de efecto de matriz en los datos anteriores. Para el análisis de muestras del mundo real, este efecto de matriz reducido de los filtros Acrodisc significa que los usuarios pueden tener el beneficio de la prefiltración sin preocuparse por distorsionar sus resultados.

Si está interesado en mejorar su preparación de muestras LC-MS / MS, consulte los filtros de jeringa Acrodisc MS de Pall que están disponibles en 13 mm de diámetro  y 25 mm de diámetro con 0.2 Membrana de WWPTFE con clasificación µm y carcasas de HDPE.

Esté atento a la parte 2 de esta serie de blogs que se centrará en la preparación de muestras de alto rendimiento en LC-MS y una técnica novedosa que reduce tres horas de un flujo de trabajo típico de LC-MS.

Fuente:

PALL (2021): ” Sample filtration can significantly improve LC-MS results but not all filters are created equal and some can introduce unwanted errors”