¿Sabes cómo facilitar la filtración de pequeños volúmenes para la preparación de muestras de  LCMS, HPLC y UHPLC?

¿Sabes cómo facilitar la filtración de pequeños volúmenes para la preparación de muestras de LCMS, HPLC y UHPLC?

OMEGA PERU BLOG

31 de julio de 2020

¿Sabes cómo facilitar la filtración de pequeños volúmenes para la preparación de muestras de LCMS, HPLC y UHPLC?

La filtración de pequeños volúmenes de líquido (<2 ml) con filtros de jeringa estándar puede ser difícil debido al volumen remanente dentro del filtro después de su uso. Al fluido remanente dentro del filtro se le conoce típicamente como el “volumen de retención”. El volumen de retención para los filtros de jeringa de 25 mm puede ser superior a 1 ml y puede hacer que la filtración de muestras de menos de 2 ml sea muy difícil, si no imposible, de filtrar.

Hay tres formas de reducir el volumen de retención en un filtro de jeringa:

1. Usar un filtro de jeringa de 13 mm diseñado específicamente para volúmenes pequeños en lugar de un filtro de 25 mm.

2. Usar un filtro de jeringa que tenga una salida de mini espiga.

3. Ejecutar una purga de aire posterior a la filtración en el filtro de la jeringa.

Pall Co. ofrece muchos filtros de jeringa de 13 mm con salidas de mini espiga para la filtración de muestras de pequeño volumen. Cuando se usa cuidadosamente con una purga de aire, las muestras tan pequeñas como 25 µL se pueden filtrar con un volumen de retención tan bajo como 5 µL. La siguiente metodología está diseñada para proporcionar orientación y obtener el menor volumen de retención posible al filtrar muestras de pequeño volumen.

Asumiremos que las muestras serán analizadas por LCMS (Cromatografía Líquida- Espectrometría de masas), por lo que utilizaremos una jeringa de vidrio y un Filtro de Jeringa Acrodisc MS de 0.2 µm, 13 mm con membrana WWPTFE diseñado para muestras de bajo volumen y bajo contenido extractables en LCMS.

Métodos

Procedimiento para obtener volúmenes de retención mínimos al filtrar muestras de <100 µL de volumen.

1. Extraiga aproximadamente 400 µL de aire en una jeringa de vidrio de 500 µL (compatible con Luer-lock), como la jeringa Hamilton.

2. Después de extraer aire, extraiga la muestra que se filtrará hasta la marca de 25 µL en la jeringa, luego adjunte el filtro de jeringa Acrodisc MS de 13 mm (PN MS-3301). Nota: Se puede conectar una aguja hipodérmica a la jeringa antes de extraer la muestra en la jeringa para garantizar la máxima recuperación de la muestra. Se pueden usar muestras de más de 25 µL.

3. Aplique presión rápida con el pulgar sobre la jeringa para comenzar la filtración. Presione el líquido y complete el volumen de aire a través del filtro. Nota: Se recomienda una aplicación rápida de la presión del pulgar para garantizar un volumen de retención más bajo.

Con este método, el volumen de retención promedio después de filtrar diez muestras de 25 µL es de 5 µL. Los siguientes son los datos de las diez muestras analizadas.

Fuente: Gilbert et al. (2013) Pall Corporation

Conclusiones

En resumen, este procedimiento puede usarse para ayudar a facilitar la filtración de volúmenes de muestra tan pequeños como 25 µL con pérdida de muestra limitada debido al volumen de retención de los filtros.

Fuente:

Gilbert E. Tumambac, Weibing Ding, y Larry Scheer. Pall Corporation. (2013). Application Note. How to Facilitate Filtration of Small Volumnes for HPLC and UHPLC Sample Prep. MI, USA.

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