¿Sabes cuáles son los 5 técnicas de PCR más conocidas?

A medida que la PCR se adopta en diferentes facetas de la ciencia y la industria, se realizan esfuerzos continuos para desarrollar sistemas de PCR avanzados, con capacidades mejoradas, como una mayor sensibilidad y especificidad. Otros avances importantes se relacionan con tiempos de ciclo de PCR más cortos, mayor productividad y flujos de trabajo automatizados. Estos avances, sin duda, contribuyen al crecimiento del mercado. Además, el aumento de la población geriátrica mundial, la alta prevalencia de enfermedades infecciosas, el aumento del número de centros de diagnóstico y hospitales, los avances tecnológicos y el aumento de la conciencia y aceptación de la medicina personalizada también se atribuyen a impulsar el tamaño del mercado de PCR. También se espera que el aumento de la financiación de I + D y la aparición de nuevos mercados sin explotar en las regiones en desarrollo proporcionen nuevas vías para el crecimiento del tamaño del mercado de tecnologías de PCR en un futuro próximo.

Tecnologías de PCR

Las técnicas de PCR ofrecen una detección y cuantificación absolutas de ADN y ARN que se utilizan cada vez más en los campos de las ciencias de la vida como la genética, la biología molecular, la biotecnología y el descubrimiento de fármacos. Además, estas tecnologías también se pueden utilizar para investigaciones penales, determinación de la identidad de los padres, análisis forense industrial y, por supuesto, diagnósticos clínicos. Las tecnologías de PCR también se han diversificado desde sus inicios, con formas variadas, ofreciendo beneficios adicionales que se adaptan a las necesidades de sus múltiples aplicaciones.

Tipos de técnicas de PCR

PCR convencional

La PCR imita lo que sucede en una célula cuando se replica el ADN; una técnica bioquímica que amplifica rápidamente la cantidad de ADN. Para la reacción, se agrega una mezcla de ADN, cebadores, ADN polimerasa resistente al calor, nucleótidos, junto con tampones adecuados y sales a un tubo y se coloca en un termociclador.

Para iniciar el proceso, la muestra se calienta hasta que se separan las hebras de doble hélice de ADN. Luego se baja la temperatura para optimizar la unión del cebador y luego se vuelve a elevar para facilitar el alargamiento de nuevas moléculas de ADN; duplicando la cantidad de ADN de interés con cada ciclo.

PCR cuantitativa

La PCR cuantitativa (qPCR) funciona mediante el uso de sondas fluorescentes; monitoreando la fluorescencia después de cada ciclo para determinar la tasa de PCR en tiempo real. La intensidad de la señal corresponde a la cantidad de amplificación del ADN. Además, el número de ciclos en los que se detecta por primera vez la fluorescencia se puede utilizar para calcular el número inicial de concentración de ADN. Los cicladores compactos y rápidos, como el sistema qPCR en tiempo real TECHNE® Prime Pro 48, pueden ofrecer resultados fiables en menos de 40 minutos.

RT-PCR

La qPCR también se ha adaptado para la amplificación de moléculas de ARN; un avance crucial en la detección de retrovirus, como el VIH, y el análisis de ARNm asociadas con cánceres. La reacción en cadena polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) es un proceso de dos pasos; el ARN extraído se convierte primero en su ADN complementario (ADNc) mediante la enzima transcriptasa inversa y luego se amplifica mediante PCR estándar. La RT-PCR precisa también es un paso crucial involucrado en la investigación y el desarrollo de vacunas.

PCR digital

La PCR digital ofrece un nivel mejorado de precisión para aplicaciones médicas especializadas. Se divide una muestra de ADN al comienzo de la reacción, para asegurar que no haya más de una molécula presente en un pozo. Después de la amplificación, la cuantificación absoluta se puede determinar mediante un simple cálculo de los pocillos positivos y negativos. El nivel de precisión puede ayudar a los médicos a comprender el número de copias de los genes involucrados en ciertos cánceres.

PCR multiplex (mPCR)

Usado a menudo en laboratorios de diagnóstico, mPCR usa simultáneamente múltiples pares de cebadores para amplificar varias regiones del mismo ácido nucleico al mismo tiempo, lo que hace posible diagnosticar varias enfermedades con una sola prueba. El termociclador TECHNE® Prime Pro 48 permite un análisis multiplex simple con hasta cuatro tintes a la vez.

Referencias

Onkar Sumant, & Tenzin Kunsel. (2017, December). Polymerase Chain Reaction Technologies Market by Technology | 2023. Allied Market Research.