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27 de Diciembre 2022
Desarrollando Ensayos de Screening de Alto Rendimiento con las Placas de Filtración Acroprep
En el presente artículo, mostraremos cómo con ayuda de las placas de filtración se puede realizar una detección más rápida de la vitamina B6 en muestras clínicas, con fines de investigación.
Empecemos conociendo más a la vitamina B6: esta interviene en unas 200 reacciones y procesos del cuerpo humano, como por ejemplo en el desarrollo del cerebro, la circulación sanguínea, la mejora del estado de ánimo, etc.
El problema con esta vitamina es que muchas personas la consumen en cantidades insuficientes; además, las pruebas de detección de la misma toman tiempo y son complicadas, dificultando la determinación o control de un paciente y el diagnóstico de alguna deficiencia.
Así, la necesidad de un ensayo rápido y de alto rendimiento es una necesidad para los médicos de primera línea. En una publicación reciente de científicos de ARUP Laboratories en Salt Lake City, describen el desarrollo de un nuevo ensayo de alto rendimiento capaz de detectar la forma circulante de vitamina B6 en el plasma de adultos y niños.
Para considerarse relevante clínicamente, debe ser lo suficientemente sencillo y eficaz para monitorizar rutinariamente las concentraciones de B6, lo suficientemente sensible para detectar cualquier variación de bajo nivel entre poblaciones, y lo suficientemente fiable para funcionar como método de primera línea para la identificación de la deficiencia de vitamina B6.
Para desarrollar un ensayo de alto rendimiento, los científicos simplificaron el ensayo convencional pero de manera que siguiera siendo tan sólido y sensible como este y sin afectar su rendimiento. Para ello, utilizaron muestras de plasma de adultos y niños. Los investigadores desarrollaron un protocolo simplificado de preparación de muestras utilizando placas de filtración de 96 pocillos AcroPrep Advance.
Luego de añadir estándares internos y TCA, las muestras de plasma se agitaron en vórtex y se centrifugaron para eliminar cualquier partícula. Posteriormente, se filtraron los sobrenadantes utilizando las placas de filtración AcroPrep.
Las placas de filtración de 96 pocillos de Pall Life Sciences permiten filtrar varias veces, son fáciles
de automatizar y se pueden filtrar por centrifugación o por colectores de vacío estándar.
De esta manera, son una estrategia fácil de usar para acelerar protocolos de laboratorio en general que necesiten de filtración. Las placas AcroPrep están diseñadas de acuerdo con las normas ANSI/SBS X-2004 y están disponibles en formatos de 24, 96 y 384 pocillos para adaptarse a las distintas necesidades de aplicación.
Las muestras de plasma filtradas se prepararon en una estación de trabajo automatizada para el análisis LC-MS/MS, el cual acelera el flujo de trabajo con mayor sensibilidad y especificidad (comparado al HPLC de fluorescencia del método convencional). Se usó una plataforma de Regeneración de Columnas Alternantes (ARC), el cual es un sistema de doble columna (el protocolo anterior era de una sola columna) que reduce el tiempo de análisis en un 30%.
En los estudios de evaluación, se vio que el nuevo ensayo siguió siendo lineal hasta 500 nmol/L, lo que está muy por encima del nivel de sensibilidad requerido para la relevancia fisiológica.
Luego de validar el ensayo, los científicos lo utilizaron para analizar muestras demográficas de población. Comprobaron que la vitamina B6 circulante era mayor en hombres que mujeres, y que las tasas más bajas de deficiencia se daban en niños y las más altas en adultos de edad avanzada. Además demostraron la presencia de variaciones estacionales significativas, con un nivel más bajo de B6 circulante durante invierno y primavera, y más alto durante verano y otoño.
Esta investigación representa un nuevo método prometedor para la evaluación clínica de los niveles circulantes de vitamina B6. En conjunto con una preparación de muestras simplificada y automatizada con LC-MS/MS de alto rendimiento para acortar el flujo de trabajo y el tiempo de análisis del instrumento. Así permitirá una evaluación más amplia de la vitamina y se espera que lleve a una mejor comprensión de la prevalencia y los efectos de la deficiencia de B6.
Las placas de filtro AcroPrep Advance son la herramienta adecuada para aumentar el rendimiento, la velocidad y permitir la automatización de multitud de protocolos de laboratorio y una amplia gama de aplicaciones analíticas.
| Para conocer más de su función y operación, visite nuestro blog “Soluciones para Eficiente Purificación de ADN y ARN” |
Fuentes :
Kushnir, M. M., Song, B., Yang, E., & Frank, E. L. (2021). Development and Clinical Evaluation of a High-Throughput LC-MS/MS Assay for Vitamin B6 in Human Plasma and Serum. The journal of applied laboratory medicine, 6(3), 702–714. https://doi.org/10.1093/jalm/jfaa166
Pall Corporation. (2022). Leveraging filtration plates to accelerate the detection of vitamin B6 in clinical samples for research purposes. Pall Laboratory. USA.
