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29 DE MAYO DE 2020
Prueba de diagnóstico del coronavirus: ¿qué es la PCR?
PCR son las siglas por las que se conoce a la reacción en cadena de la polimerasa, una técnica científica avanzada que fue inventada por el bioquímico estadounidense Kary Mullis en 1985, y que le valió el Premio Nobel de Medicina en el año 1993, y que se basa en las características de estabilidad al calor de una enzima polimerasa. Esta técnica permite amplificar pequeñas regiones específicas del ADN en laboratorio. Es decir, consigue que un pequeño segmento de ADN que pasaría desapercibido en un análisis cualquiera se multiplique millones de veces y así sea fácil de detectar.
¿Qué etapas sigue la Reacción en cadena de polimerasa (PCR)?
La PCR se puede realizar dentro de un solo microtubo con productos químicos apropiados y un termociclador .
Los 4 componentes (reactivos o químicos) necesarios son los siguientes:
• Muestra de ADN o ARN (de saliva, sangre, cabello, raspado de piel, etc.)
• ADN Primers: ADN monocatenario que promueve la síntesis de una cadena complementaria de nucleótidos.
• ADN polimerasa: una enzima que ayuda en la síntesis de una cadena complementaria de ADN.
• Una mezcla de solución de nucleótidos que contiene adenina (A), timidina (T), citosina (C) y guanina (G) utilizada para construir cadenas duplicadas de ADN / ARN.
1. DESNATURALIZACIÓN
En esta etapa, las cadenas de ADN son calentadas y separadas a una temperatura de 95 °C durante 20-30 segundos, el tiempo depende de la secuencia de templado,velocidad en la que el termociclador aumenta la temperatura.
2. HIBRIDACIÓN
En esta etapa, los primeros se alinean al extremo 3’ del templado previamente separado e hibridan con su secuencia complementaria templado-primeros, es importante que la temperatura de hibridación sea la óptima; ésta generalmente oscila entre 50-60 °C.
3. EXTENSIÓN
Los nucleótidos (A, T, C, G) de la solución de mezcla añadida se unirán con las hebras individuales separadas de ADN que resultaron del proceso de calentamiento.
La temperatura óptima para la reacción es de 72 °C, ya que a esa temperatura la enzima es funcional.
Una vez unidos, forman una nueva cadena complementaria de ADN (denominada extensión del ADN).
Imagen 1: Etapas de un ciclo de PCR
Los equipos de PCR –Tiempo real que actualmente se están usando para la detección de coronavirus siguen este procedimiento internamente con la adición de unos tintes fluorescentes, los cuales se unen a algunas de las cadenas de nucleótidos, lo que permite a los técnicos de laboratorio medir productos específicos y sus cantidades durante los ciclos de amplificación / replicación.
Esto permite a los técnicos de laboratorio omitir la electroforesis en gel u otros procedimientos secundarios necesarios para el análisis final de los productos de PCR, produciendo así resultados más rápidos.
¿Qué aplicaciones tiene el PCR?
Identificación y caracterización de agentes infecciosos.
- Detección directa de microorganismos en muestras de pacientes.
- Identificación de microorganismos cultivados.
- Detección de resistencia a los anti microbianos.
- Investigación de la relación de cepas de un patógeno de interés.
Huella digital genética (aplicación forense / prueba de paternidad)
Detección de mutación (investigación de enfermedades genéticas)
Genes de clonación
Secuenciación porPCR
Las ventajas del PCR-Tiempo Real para la detección de pacientes con COVID-19 son:
• Tiene una alta especificidad, ya que puede diferenciar entre dos microorganismos muy cercanos evolutivamente.
• Tiene una alta sensibilidad, ya que puede detectar cantidades de 20 copias/ml, o incluso menos, de material genético viral.
• Y es precoz porque se detecta virus en las primeras fases de la infección respiratoria.
SISTEMA DE PCR EN TIEMPO REAL TECHNE PRIME PRO 48; 100-240 V, 50/60 HZ
Equipo análogo a lo recomendado por la CDC-E
| ESPECIFICACIONES TÉCNICAS | ||
| Capacidad | Placa de 48 pocillos, de 5 a 20 µL / pocillo | • Ciclaje rápido: ejecuta 40 ciclos en menos de 20 minutos cuando está optimizado. • Uniformidad líder en el mercado ± 0.1 ° C a 95 °C • Procese hasta un 40% más de muestras por hora que un instrumento tradicional de 96 pocillos. • Un sistema óptico avanzado de alto rendimiento ofrece detección de fluorescencia precisa y sensible. • La unidad qPRC cumple con MIQE, presenta un control LED adaptativo y funcionalidad de fusión de alta resolución (HRM). • El software fácil de usar proporciona control de instrumentos, recopilación de datos y análisis de datos. • Acepta todas las marcas populares de reactivos. Siempre lee los 48 pocillos, con los 4 filtros en cada ciclo, y normaliza automáticamente la fluorescencia. |
| Rango de Temperatura | 30-100 °C | |
| Exactitud de Temperatura | ±0.25⁰C | |
| Velocidad Max de Calentamiento | 5.5⁰C por segundo | |
| Uniformidad del bloque | ±0.1⁰C | |
| Memoria | La unidad guarda los datos de ejecución del último experimento, o ilimitados a través de USB | |
| Descripción | Sistema de PCR en tiempo real; 100-240 V, 50/60 Hz | |
| Voltaje | 100 a 240 VAC | |
ACCESORIOS PARA EL PCR-RT PRIME PRO 48
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